(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210492268.6 (22)申请日 2022.05.07 (71)申请人 河南农业大 学 地址 450000 河南省郑州市文化路95号 (72)发明人 胡建斌　李丽丽　李琼　侯娟　 李文龙　王盼乔　李翔　杨路明　 朱华玉　 (74)专利代理 机构 郑州三阳专利代理事务所 (普通合伙) 41175 专利代理师 范向南 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6869(2018.01) A01H 1/00(2006.01)A01H 1/02(2006.01) A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 一种甜瓜耐冷QTL及其连锁的分子标记的方 法与应用 (57)摘要 本发明公开了一种甜瓜耐冷QTL及其连锁的 分子标记的方法与应用， 以甜瓜耐冷材料PI ‑ 169329为母本， 冷敏感材料20KH.111为父本， 构 建F2及F2:3群体， 分别获得实验室和田间条件下 亲本及F2:3群体在冷胁迫后的冷害指数， 利用 1090个bin标记构建的高密度遗传图谱， 进行耐 冷QTL定位， 最终获得甜瓜耐冷QTL及其连锁分子 标记。 本发明利用甜瓜材料PI ‑169329和 20KH.111的F2群体构建的高密度遗传图谱， 结合 两年田间和实验室的F2:3群体在冷胁迫后的冷害 指数数据， 最终鉴定出两个甜瓜耐冷主效QT L。 依 据两个耐冷主效QTL紧密连锁的分子标记， 能够 在DNA水平上对分离群体的耐冷性进行选择， 为 甜瓜耐冷 分子育种提供位 点信息和标记资源。 权利要求书1页 说明书6页 CN 114634995 A 2022.06.17 CN 114634995 A 1.一种甜瓜耐冷QTL及其连锁的分子标记的方法， 其特征在于， 甜瓜耐冷QTL包括 qCL3.1和qCL11.1； qCL3.1位于甜瓜3号染色体上， 与其连锁的分子标记为： B1、 B2、 B3、 B4和 B5； qCL11.1位于甜瓜1 1号染色体上， 与其连锁的分子标记为： B6和B7； 所述方法包括以下步骤： （1） 利用耐冷甜瓜材料PI ‑169329为母本， 冷敏感材料20KH.111为父本， 构建F2及F2:3群 体； （2） 对亲本材料PI ‑169329和20KH.111进行重测序， 并利用ddRAD ‑seq技术对140个F2单 株进行简化基因组测序； 获得亲本与140个F2单株之间具有多态性的SNP， 转化为bin标记， 并对连锁群内的标记进行排序， 获得遗传距离， 构建高密度遗传图谱； （3） 田间利用自然低温对甜瓜F2:3幼苗进行低温胁迫处理， 统计冷害指数； 同时实验室 内对F2:3幼苗进行4℃冷处 理， 统计冷害指数； （4） 根据构建的高密度遗传图谱， 结合田间和实验室F2:3幼苗的冷害指数数据结果， 进 行甜瓜耐冷QTL定位。 2.根据权利要求1所述的甜瓜耐冷QTL及其连锁的分子标记的方法的应用， 其特征在 于， 在甜瓜耐冷分子 育种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114634995 A 2一种甜瓜耐冷Q TL及其连锁的分子标记的方 法与应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学技术领域， 特别涉及一种甜瓜耐冷QTL及其连锁的分子标 记的方法与应用。 背景技术 [0002]甜瓜起源于热带和亚热带地区， 属于冷敏感植物， 极不耐寒。 我国甜瓜种植面积和 产量均位于世界前列， 且一直保持着世界最大甜瓜生产国的优势。 近年来 我国甜瓜栽培以 设施栽培为主， 而甜瓜在 整个生育期间均可发生冷害反应， 尤其是在东北、 华北和长江中下 游地区进行早春设施栽培时， 甜瓜在育苗或定植初期极易遭遇倒春寒等低温侵袭。 低 温冷 害严重制约着我国设施甜瓜的生产效益和产业发展， 是目前亟待解决的生产实际问题。 如 何快速准确选育耐冷甜瓜品种 是甜瓜育种工作者长期追求的目标。 传统育种方法费时、 费 力、 表型鉴定困难、 育种效率低， 由于耐冷性是复杂的数量性状， 耐冷反应涉及 多个基因， 且 基因与环境间存在明显的互作效应， 耐冷基因 聚合更为困难。 随着分子标记技术的发展， 利 用耐冷基因及与其连锁的分子标记， 开展分子标记辅助选择育种可以有效地解决这一问 题。 发明内容 [0003]本发明要解决的技术问题在于提供一种甜瓜耐冷QTL及其连锁的分子标记的方法 与应用， 能够在DNA水平上对分离群体的耐冷性进 行选择， 为甜瓜耐冷分子育种提供位点信 息和标记资源。 [0004]为实现上述目的， 本发明提供如下技术方案： 一种甜瓜耐冷QTL及其连锁的分子标 记的方法， 甜瓜耐冷QTL包括qCL3.1和qCL11.1； qCL3.1位于甜瓜3号染色体上， 与其连锁的 分子标记为： B1、 B2、 B3、 B4和B5； qCL11.1位于甜瓜11号染色体上， 与其连锁的分子标记为： B6和B7； 所述方法包括以下步骤： （1） 利用耐冷甜瓜材料PI ‑169329为母本， 冷敏感材料20KH.111为父本， 构建F2及 F2:3群体； （2） 对亲本材料PI ‑169329和20KH.111进 行重测序， 并利用ddRAD ‑seq技术对140个 F2单株进行简化基因组测序； 获得亲本与140个F2单株之间具有多态性的SNP， 转化为bin标 记， 并对连锁群内的标记进行排序， 获得遗传距离， 构建高密度遗传图谱； （3） 田间利用自然低温对甜瓜F2:3幼苗进行低温胁迫处理， 统计冷害指数； 同时实 验室内对F2:3幼苗进行4℃冷处 理， 统计冷害指数； （4） 根据构建的高密度遗传 图谱， 结合田间和实验室F2:3幼苗的冷害指数数据结 果， 进行甜瓜耐冷QTL定位。 [0005]本发明提供如下技术方案： 一种甜瓜耐冷QTL及其连锁的分子标记的方法的应用， 在甜瓜耐冷分子 育种中的应用。说　明　书 1/6 页 3 CN 114634995 A 3