(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210496743.7 (22)申请日 2022.05.09 (71)申请人 济南千麦医学检验 有限公司 地址 250000 山东省济南市高新区颖秀路 2600号山东大学科技产业园9号楼西 区二层 (72)发明人 高霞　 (74)专利代理 机构 济南守航知识产权代理事务 所(普通合伙) 37368 专利代理师 陈宾宾 (51)Int.Cl. C12M 1/34(2006.01) C12M 1/26(2006.01) C12M 1/00(2006.01) C12Q 1/70(2006.01)C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂 盒 (57)摘要 本发明涉及生物 技术技术领域， 尤其涉及6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒。 包 括取样盒和检测盒， 所述取样盒上设置有盒盖、 放置槽、 冰袋盒和取样刷槽， 所述检测盒上设置 有盒盖， 所述检测盒内设置有阳性参照瓶、 阴性 参照瓶、 RNA抽提试剂瓶、 漂洗瓶、 cDNA逆转录试 剂瓶和实时荧光定量PCR试剂瓶， 所述实时荧光 定量PCR试剂瓶内盛有PCR缓冲液、 上下游引物和 探针。 将RNA抽提、 cDNA逆 转录、 荧光定量PCR检测 所需大部分试剂集中于试剂盒内， 最大可能减少 了自行调配时出现的误差， 取样后可直接检测， 也可以将试剂瓶放入放置槽进行转运， 使用方 便。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图2页 CN 114933961 A 2022.08.23 CN 114933961 A 1.6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒， 其特征在于： 包括取样盒 （3） 和检测 盒 （6） ， 所述取样盒 （3） 上设置有盒盖 （1） 、 放置槽 （2） 、 冰袋盒 （4） 和取样刷槽 （5） ， 所述取样 刷槽 （5） 位于取样盒 （3） 和检测盒 （6） 之间， 所述检测盒 （6） 上设置有盒盖 （1） ， 所述检测盒 （6） 内设置有阳性参照瓶、 阴性参照瓶、 RNA抽提试剂瓶、 漂洗瓶、 cDNA逆转录试剂瓶和实时 荧光定量PCR试剂瓶， 所述实时荧光定量PCR试剂瓶内盛有PCR缓冲液、 上下游引物和探针， 所述PCR缓冲液包括pH为7.5的20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷硫酸盐溶液、 10mmol/L的氯化 镁溶液、 100mmol/L的氯化钾溶 液。 2.根据权利要求1所述的6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒， 其特征在于： 所述取样刷槽 （5） 内设置有取样刷， 所述取样刷包括伸缩 杆 （7） 、 透明套筒 （8） 和刷头 （9）,所 述伸缩杆 （7） 活动设置于所述透明套筒 （8） 内， 所述透明套筒 （8） 上设置有凹槽， 所述刷头 （9） 卡接 于凹槽上。 3.根据权利要求1所述的6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒， 其特征在于： 所述上游引物序列为  5’ ‑GAGCTGTCGCTTAATTGCTC ‑3’， 所述下游引物序列为  5’ ‑ TGCTAATTCGGTGCTTACCTG‑3’， 所述探针序列为5 ’ ‑GGTGTTCCCATAGATGCAGTA ‑3’。 4.根据权利要求1所述的6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒， 其特征在于： 所述阳性 参照瓶内盛 有6、 11型人乳头瘤病毒混合强阳性样本 。 5.根据权利要求1所述的6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒， 其特征在于： 所述阴性 参照瓶内盛 有灭菌生理盐水。 6.根据权利要求1所述的6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒， 其特征在于： 所述RNA抽提试剂瓶试剂组分为10%TritonX ‑100,10%去氧胆酸钠， 200mmol/L  苯甲基磺酰 氯和100mmol/L EDTA。 7.根据权利要求1所述的6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒， 其特征在于： 所述漂洗瓶中盛 有70％乙醇。 8.根据权利要求1所述的6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒， 其特征在于： 所述cDNA逆转录试剂瓶盛有cDNA逆转录试剂， 所述cDNA逆转录试剂包括10 ×RT Mix、 dNTPs、 oligo‑dT、 逆转录酶、 氯化镁、 DEPC ‑H2O。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114933961 A 26、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术技术领域， 尤其涉及6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测 试剂盒。 背景技术 [0002]人乳头瘤病毒是一种嗜上皮性双链环状D NA病毒， 由7800～7900个碱基对组成， 含 有8或9个开放阅读 框 （ORFs） ， 包裹在无包膜衣壳蛋白内， 是一种没有包膜的病毒颗粒。 其基 因组按功能分为早期转录区 （E区） 、 晚期转录区 （L区） 和上游调控区 （URR） 三个主要区域。 早 期转录区 （E区） 有8个开放读码框架， 是编码病毒周期所必需的基因， 并在细胞转化中起重 要作用 （E1、 E2、 E4、 E5、 E6和E7） ， 其中E6、 E7是病毒癌基因。 晚期转录区 （L区） 编码病毒颗粒 的主要外壳蛋白L1和次要外壳蛋白L2。 上游调控区 （URR） 也称为长控制区 （LCR） ， 是含有复 制起点和转录因子结合位点的非编码区， 通过控制病毒基因转录调节DNA复制。 尽管不同人 乳头瘤病毒分子ORF的大小和数量存在差异， 但所有人乳头瘤病毒都含有保守的核心基因 参与复制 （即E1和E2） 和包装 （即L1和L2） ， 其余基因 （即E4、 E5、 E6和E7） 在驱动细胞周期、 免 疫逃逸和病毒释放方面发挥作用。 [0003]人乳头瘤病毒 感染具有严格的种属与组织特异性， 只对人的皮肤和黏膜组织有特 异性感染能力。 根据病毒感染后致癌性的高低， 可以将这些亚型分为两大类。 其中比较重要 的亚型及其对应的临床病变主要如下： （1） 低危亚型： 主要包括6、 11、 40和42等， 可以引起生 殖器疣等上皮组织良性增生。 （2） 高危亚型： 主要包括16、 18、 31、 33、 35、 39、 45、 51以及66等， 可以引起宫颈癌、 肛门癌、 口咽癌等恶性肿瘤。 国内现有基于实时荧光定量PCR技术定量检 测人乳头瘤病毒方法多针对于高危亚型， 且自行取样时存在诸多不便， 检测时试剂 需求复 杂。 发明内容 [0004]本发明的目的是解决现有技术中的问题， 提供6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR 检测试剂盒。 [0005]本发明的技 术方案是： 6、 11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒， 包括取样盒3和检测盒6， 所述取样 盒3上设置有盒盖1、 放置槽2、 冰袋盒4和取样刷槽5， 所述取样刷槽5位于取样盒3和检测盒6 之间， 所述检测盒6上设置有盒盖1， 所述检测盒6内设置有阳性参照瓶、 阴性参照瓶、 RNA抽 提试剂瓶、 漂洗瓶、 cDNA逆转录试剂瓶和实时荧光定量PCR试剂瓶， 所述实时荧光定量P CR试 剂瓶内盛有PCR缓冲液、 上下游引物和探针， 所述PCR缓冲液包括pH为7.5的20mmol/L的三羟 甲基氨基甲烷硫酸盐溶 液、 10mmol/L的氯化镁溶 液、 100mmol/L的氯化钾溶 液。 [0006]所述取样刷槽5内设置有取样刷， 所述取样刷包括伸缩杆7、 透明套筒8和刷头9,所 述伸缩杆7活动设置于所述透明套筒8内， 所述透明套筒8上设置有凹槽， 所述刷头9卡接于 凹槽上。说　明　书 1/4 页 3 CN 114933961 A 3