(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210519283.5 (22)申请日 2022.05.13 (71)申请人 北京市农林科 学院 地址 100097 北京市海淀区西郊板 井彰化 路50号 (72)发明人 丁云花　李丽　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 闫书宁 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种同时鉴定三个松花菜品种的方法及其 使用的引物对 (57)摘要 本发明公开了一种同时鉴定京松1号、 京松2 号和京松3号三个松花菜品种的方法及其使用的 引物对。 引物对由SEQIDN O:1所示的单链DNA分子 和SEQIDNO:2所示的单链DNA分子组成。 采用该引 物对在幼苗期即可实现三个品种的真伪鉴定。 相 比传统田间鉴定方法， 本发明可以大大缩短时 间， 还可节省用地、 用工、 水肥等。 本发明具有重 要的应用价 值。 权利要求书3页 说明书8页 序列表1页 附图3页 CN 114990248 A 2022.09.02 CN 114990248 A 1.一种鉴定京松1号、 京松2号和京松3号三个品种中至少一种的方法， 包括如下步骤： 以待测松花菜的基因组DNA为模板， 采用引物对CH19 ‑20进行PCR扩增， 检测， 然后进行如下 判断： 如果仅得到三种扩增片段且大小分别为264bp、 286bp和310bp， 则待测松花菜为京松1 号； 如果仅得到三种扩增片段且大小分别为269bp、 288bp和312bp， 则待测松花菜为京松2 号； 如果仅得到 两种扩增片段且大小分别为2 98bp和267bp， 则待测松花菜为京松3号； 所述引物对C H19‑20由上游引物和下游引物组成； 上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示； 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示。 2.一种用于鉴定待测松花菜品种或品系为9个松花菜品种或品系中的哪一种的方法， 包括如下步骤： 以待测松花菜的基因组DNA为模板， 采用引物对进行PCR扩增， 检测， 然后进 行如下判断： 如果仅得到三种扩增片段且大小分别为264bp、 286bp和310bp， 鉴定待测松花菜为京松 1号； 如果只得到一种扩增片段且大小为264bp， 鉴定待测松花菜为细胞质雄性不育系 CMS060； 如果只得到一种扩增片段且大小为286bp， 鉴定待测松花菜为自交系1028 ‑1； 如果仅得到三种扩增片段且大小分别为269bp、 288bp和312bp， 鉴定待测松花菜为京松 2号； 如果只得到一种扩增片段且大小为269bp， 鉴定待测松花菜为细胞质雄性不育系 CMS105； 如果只得到一种扩增片段且大小为28 8bp， 鉴定待测松花菜为自交系3 6B； 如果仅得到 两种扩增片段且大小分别为2 98bp和267bp， 鉴定待测松花菜为京松3号； 如果只得到一种扩增片段且大小为298bp， 鉴定待测松花菜为细胞质雄性不育系 CMS070； 如果只得到一种扩增片段且大小为267bp， 鉴定待测松花菜为自交系SH 65‑8； 所述引物对C H19‑20由上游引物和下游引物组成； 上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示； 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示； 所述9个松花菜品种或品系为京松1号、 细胞质雄性不育系CMS060、 自交系1028 ‑1、 京松 2号、 细胞质雄性不育系CMS105、 自交系36B、 京松3号、 细胞质雄性不育系CMS070和自交系 SH65‑8。 3.一种用于鉴定待测松花菜品种或品系为9个松花菜品种或品系中的哪一种的方法， 包括如下步骤： (1)以待测松花菜的基因 组DNA为模板， 采用引物对C H19‑20进行PCR扩增； 检测； (2)分别以9个松花菜品种或品系的基因组DNA为模板， 采用所述引物对CH19 ‑20进行 PCR扩增； 所述9个松花菜品种或 品系为京松1号、 细胞质雄性不育系CMS060、 自交系1028 ‑1、权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114990248 A 2京松2号、 细胞质雄性不育系CMS105、 自交系36B、 京松3号、 细胞质雄性不育系CMS070和自交 系SH65‑8； 检测； (3)完成步骤(1)和(2)后， 按照如下 标准进行判断： 如果待测松花菜的PCR扩增产物与京松1号的PCR扩增产物一致， 则待测松花菜为京松 1 号； 如果待测松花菜的PCR扩增产物与细 胞质雄性不育系CMS060的PCR扩增产物一致， 则 待 测松花菜为细胞质雄 性不育系CMS060； 如果待测松花菜的PCR扩增产物与自交系1028 ‑1的PCR扩增产物一致， 则 待测松花菜为 自交系1028 ‑1； 如果待测松花菜的PCR扩增产物与京松2号的PCR扩增产物一致， 则待测松花菜为京松2 号； 如果待测松花菜的PCR扩增产物与细 胞质雄性不育系CMS105的PCR扩增产物一致， 则 待 测松花菜为细胞质雄 性不育系CMS105； 如果待测松花菜的PCR扩增产物与自交系36B的PCR扩增产物一致， 则待测松花菜为自 交系36B； 如果待测松花菜的PCR扩增产物与京松3号的PCR扩增产物一致， 则待测松花菜为京松3 号； 如果待测松花菜的PCR扩增产物与细 胞质雄性不育系CMS070的PCR扩增产物一致， 则 待 测松花菜为细胞质雄 性不育系CMS070； 如果待测松花菜的PCR扩增产物与自交系SH65 ‑8的PCR扩增产物一致， 则 待测松花菜为 自交系SH 65‑8； 所述引物对C H19‑20由上游引物和下游引物组成； 上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示； 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示。 4.根据权利要求1至 3任一所述的方法， 其特 征在于： 所述检测为 琼脂糖凝胶电泳检测。 5.引物对C H19‑20， 由上游引物和下游引物组成； 上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示； 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示。 6.权利要求5所述引物对CH19 ‑20在鉴定京松1号、 京松2号和京松3号三个品种中至少 一种中的应用。 7.权利要求5所述引物对CH19 ‑20在鉴定9个松花菜品种或品系中的应用； 所述9个松花 菜品种或品系为京松1号、 细胞质雄性不育系CMS060、 自交系1028 ‑1、 京松2号、 细胞质雄性 不育系CMS105、 自交系3 6B、 京松3号、 细胞质雄 性不育系CMS070和自交系SH 65‑8。 8.含有权利要求5所述引物对C H19‑20试剂盒。 9.权利要求8所述试剂盒的制备方法， 包括将权利要求5所述引物对CH19 ‑20中的各条 引物分别单独包 装的步骤。 10.权利要求8所述试剂盒的应用， 为a1)或a2)： a1)鉴定京松1号、 京松 2号和京松3号 三个品种中至少一种； a2)鉴定9个松花菜品种或品系中的应用； 所述9个松花菜品种或品系为京松1号、 细胞权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114990248 A 3