(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210542498.9 (22)申请日 2022.05.18 (71)申请人 武汉艾米森生命科技有限公司 地址 430000 湖北省武汉市武汉东湖新 技 术开发区高新大道818号武汉高科医 疗器械园B地块一期B10栋1层04号 (72)发明人 蔡迪　张良禄　董兰兰　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 专利代理师 张灵莉 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测HCG9基因甲基化的试剂在制备诊断膀 胱癌的产品中的应用 (57)摘要 本发明涉及一种检测HCG9基因甲基化的试 剂在制备诊断膀胱癌的产品中的应用。 通过检测 HCG9基因甲基化来诊断膀 胱癌， 具有较高的特异 性， 可以有效地提高早期膀胱癌的检出率， 且稳 定性好， 准确性高， 易于早期诊断， 对医师技术水 平的依赖性较低， 且无创伤性， 应用前 景好。 权利要求书2页 说明书16页 序列表6页 CN 114959030 A 2022.08.30 CN 114959030 A 1.检测HCG9基因甲基化的试剂在制备诊断膀胱癌的产品中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 以GRCh38.p13为参考， 所述试剂能够检测 chr6： 29975312～29975949区域的全长或部分区域的 甲基化水平； 可选地， 所述试剂能够检测如下区域中的至少一个区域的全长或部分区域的甲基化水 平： Chr6： 29975312～299 75466的正链、 Chr6： 29975464～299 75645的正链、 Chr6： 29975602 ～29975770的正链、 Chr6： 29975776～29975919的正链、 Chr6： 29975720～29975949的负链、 Chr6： 29975434～ 29975778的负链和C hr6： 29975313～29975456的负链。 3.一种膀胱癌的检测试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括用于检测HCG9基因的甲基 化水平的试剂。 4.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 以GRCh38.p13， 所述试剂用于检测chr6： 29975312～29975949区域的全长或部分区域的 甲基化水平； 可选地， 所述试剂能够检测如下区域中的至少一个区域的全长或部分区域的甲基化水 平： Chr6： 29975312～299 75466的正链、 Chr6： 29975464～299 75645的正链、 Chr6： 29975602 ～29975770的正链、 Chr6： 29975776～29975919的正链、 Chr6： 29975720～29975949的负链、 Chr6： 29975434～ 29975778的负链和C hr6： 29975313～29975456的负链。 5.根据权利要求3或4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒通过下述方法中的至少 一种检测HCG9基因的甲基化水平： 甲基化特异性PCR法、 荧光定量PCR法、 亚硫酸氢盐测序 法、 甲基化特异性微阵列法、 全基因组甲基化测序法、 焦磷酸测序法、 甲基化特异性高效液 相层析法、 数字PCR法、 甲基化特异性高分辨率溶解曲线法和甲基化敏感性限制性内切酶 法。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂包括引物对； 可选地， 所述试剂还 包括与所述引物对 对应的检测探针。 7.根据权利要求6所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述引物对包括以下引物对中的至少一 组： 用于检测Chr6： 29975312～29975466区域内全长或部分区域的正链的甲基化水平的第 一引物对、 用于检测Chr6： 29975464～29975645区域内全长或部分区域的正链的甲基化水 平的第二引物对、 用于检测Chr6： 29975602～29975770 区域内全长或部分区域的正链的甲 基化水平的第三引物对、 用于检测Chr6： 29975776～29975919区域内全长或部分区域的正 链的甲基化水平的第四引物对、 用于检测Chr6： 29975720～29975949区域内全长或部分区 域的负链的甲基化水平的第五引物对、 用于检测Chr6： 29975434～29975778区域内全长或 部分区域的负链的甲基化水平的第六引物对、 用于检测Chr6： 29975313～29975456 区域内 全长或部分区域的负链的 甲基化水平的第七引物对。 8.根据权利 要求7所述的试剂盒， 其特征在于， 所述第一引物对的核苷酸序列如SEQ  ID  NO： 1～2所示或如SEQ  ID NO： 15～16所示； 和/或， 所述第二引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 3～4所示或如SEQ  ID NO： 18～19 所示； 和/或， 所述第三引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 5～6所示或如SEQ  ID NO： 21～22权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114959030 A 2所示； 和/或， 所述第四引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 7～8所示； 和/或， 所述第五引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 9～10所示或如SEQ  ID NO： 24～25 所示； 和/或， 所述第六引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 11～12所示或如SEQ  ID NO： 27～ 28所示； 和/或， 所述第七引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 13～14所示或如SEQ  ID NO： 30～ 31所示。 9.根据权利要求8所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂还包括与所述引物对对应的检 测探针， 其中： 与序列如SEQ  ID NO： 15～16所示的引物对对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ  ID  NO： 17所示； 和/或， 与序列如SEQ  ID NO： 18～19所示的引物对对应的检测探针的核苷酸序 列如SEQ ID NO： 20所示； 和/或， 与序列如SEQ  ID NO： 21～22所示的引物对对应的检测探针 的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 23所示； 和/或， 与序列如SEQ  ID NO： 24～2 5所示的引物对对应 的检测探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 26所示； 和/或， 与序列如SEQ  ID NO： 27～28所示的 引物对对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 29所示； 和/或， 与序列如SEQ  ID NO： 30 ～31所示的引物对 对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 32所示。 10.根据权利 要求3、 4、 6、 7、 8或9所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括核酸提 取试剂、 甲基化 转化试剂、 质控试剂、 PCR反应试剂和 测序试剂中的至少一种。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114959030 A 3