! 7 ,     江苏省市场监督管理局 发　布 中 国 标 准 出 版 社 出　版双孢蘑菇菌种工厂化生产技术规程 Code of practice for spawn factory production of Agaricus bisporus 2023 -07-25 发布 2023 -08-25 实施CCS B 39 DB32/T 4526 —2023ICS 65.020.20 DB32/T 4526 —2023 前言…………………………………………………………………………………………………………… Ⅲ 1 范围………………………………………………………………………………………………………… 1 2 规范性引用文件 …………………………………………………………………………………………… 1 3 术语和定义 ………………………………………………………………………………………………… 1 4 技术要求 …………………………………………………………………………………………………… 1 5 生产工艺 …………………………………………………………………………………………………… 3 6 质量控制与检验 …………………………………………………………………………………………… 4 7 标签、标志、包装、运输及贮存 ……………………………………………………………………………… 5 附录 A （资料性）双孢蘑菇各级菌种的常用培养基配方 …………………………………………………… 7 附录 B （资料性）双孢蘑菇各级菌种培养质量要求 ………………………………………………………… 8目　 次 Ⅰ DB32/T 4526 —2023 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由江苏省农业农村厅提出并归口 。 本文件起草单位 ：江苏省农业技术推广总站 、江苏蕈源种业科技有限公司 、江苏省质量和标准化研 究院。 本文件主要起草人 ：顾鲁同、马金骏、宋金俤、夏冬健、曹思齐、曹艳芳、陆敬利、曾晓萍。 Ⅲ DB32/T 4526 —2023 双孢蘑菇菌种工厂化生产技术规程 1 范围 本文件规定了双孢蘑菇菌种工厂化生产的技术要求 、生产工艺 、质量控制与检验及标签 、标志、包装、 运输和贮存 。 本文件适用于双孢蘑菇菌种工厂化生产 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB/T 191　包装储运图示标志 GB/T 12728　食用菌术语 GB 19171　双孢蘑菇菌种 GB 50072　冷库设计规范 GB 50073　洁净厂房设计规范 NY/T 528　食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1742　食用菌菌种通用技术要求 3 术语和定义 GB/T 12728 界定的以及下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 批次 spawn batch 同一来源 、同一品种 、同一培养基配方 、同一天接种 、同一培养条件和质量基本一致的符合规定数量 的菌种。 注： 每批次数量母种 ≥50支试管（或培养皿 ） 、原种 ≥50瓶（袋，0.5 kg计） 、栽培种 ≥2 000袋（0.5 kg计） 。 4 技术要求 4.1 菌种厂条件 4.1.1 厂区选址 地势高燥 、通风良好 、排水畅通 、交通便利 。1 000 m之内无规模养殖的禽畜舍 、垃圾和粪便堆积场 ， 无污水、废气、废渣、烟尘和粉尘污染源 ，500 m 内无食用菌栽培场 、集贸市场 。 1 DB32/T 4526 —2023 4.1.2 厂房布局 4.1.2.1 总体要求 厂区应设置摊晒场 、原材料库 、配料分装室 （场） 、灭菌室、冷却室、接种室、培养室、检验室、冷藏库等 。 应符合 NY/T 528 的规定。 4.1.2.2 摊晒场 应地面平整 、光照充足 、空旷宽敞 、相互隔离 、远离火源 。 4.1.2.3 原材料库 应防雨防潮 、防虫、防鼠、防火、防杂菌污染 。 4.1.2.4 配料分装室 （场） 水电方便 ，空间充足 。用于拌料机 、装袋机等大型机具作业 。 4.1.2.5 灭菌室 水电安装合理 ，操作安全 ，应用高温高压自动化控制灭菌柜 ，灭菌柜进 、出口分离 。 4.1.2.6 冷却室 配套安装新风输送系统 ，冷却室与外界隔绝 ，具备空气万级净化度 ，洁净、无尘、制冷散热 。应符合 GB 50073的规定。 4.1.2.7 接种室 配套安装新风输送系统 ，新风口处新风长期开通 ，保持室内风压高于室外 。接种平台上层流罩下空 气净化程度应达百级 ，内壁和地面光滑 ，易于清洗和消毒 。应符合 GB 50073的规定。 4.1.2.8 培养室 配套新风输送系统 ，空气净化程度达万级 ，温度自动控制 ；内壁和房屋顶部光滑 ，便于清洗和消毒 ；墙 壁厚度适当 。应符合 GB 50073的规定。 4.1.2.9 检验室 配套新风输送系统 。应符合 GB 50073的规定。 4.1.2.10 冷藏库 应符合 GB 50072 的要求。 4.2 培养容器 4.2.1 使用原则 每批次菌种的容器规格保持一致 。 2 DB32/T 4526 —2023 4.2.2 母种培养容器 使用 20 mm× 200 mm规格玻璃试管 ，或直径 9 cm的培养皿 。棉塞应使用梳棉或化纤棉 ，也可用硅 胶塞代替棉塞 ，不可使用脱脂棉 。 4.2.3 原种培养容器 使用耐 126 ℃高温、不影响观察菌丝生长情况的带盖塑料瓶或玻璃瓶 ，或耐 126 ℃高温、具孔径 0.2 µm~ 0.5 µm透气膜的聚丙烯塑料袋 。 4.2.4 栽培种培养容器 使用尺寸 ≥18 cm× 34 cm，耐126 ℃高温的聚丙烯塑料折角袋 ，或耐 126 ℃高温、具0.5 µm~ 1.5 µm 孔径透气膜的聚丙烯塑料袋 。 4.3 培养基原料 4.3.1 化学试剂类 化学试剂类原料如硫酸镁 、磷酸二氢钾等 ，应使用化学纯或以上级别的试剂 。 4.3.2 生物制剂和天然材料类 生物制剂 ，如酵母粉和蛋白胨 ；天然材料 ，如棉籽壳 、麦麸等。原料应新鲜 、无霉变、洁净、干燥。 4.4 人员要求 生产技术人员 、检验人员应取得菌种生产检验所需相应资质 。 5 生产工艺 5.1 工艺流程 5.1.1 母种生产工艺流程 培养基配制 →高压灭菌 →冷却 →接种 →培养 →成品 →冷贮。 5.1.2 原种、栽培种生产工艺流程 培养基配制 →浸泡 →蒸煮 →分装 →灭菌 →冷却 →接种 →培养 →成品 →装箱 →冷贮 →冷链运输 。 5.2 培养基配方 配方见附录 A。 5.3 装料 5.3.1 原种培养基装料 宜用 850 mL耐高温塑料瓶 、玻璃瓶，装料 500 g后，擦洗瓶口旋紧瓶盖 ；或18 cm× 40 cm，具孔径 0.2 µm~ 0.5 µm透气膜的聚丙烯塑料袋 ，装料 1 000 g，料装好后折下袋口与并排的菌袋靠紧 。 3 DB32/T 4526 —2023 5.3.2 栽培种培养基装料 宜用 18 cm× 34 cm聚丙烯塑料折角袋 ，装料 1 000 g后，套上盖子 ；或40 cm× 60 cm，具孔径 0.5 µm~ 1.5 µm透气膜的聚丙烯塑料袋 ，装料 2 500 g，装料后折下袋口与并排菌袋靠紧 。 5.4 灭菌 应在培养基配制完成后 4 h内进行灭菌 。母种培养基灭菌条件 ：0.11 MPa~ 0.12 MPa，121 ℃， 50 min。原种培养基 、栽培种培养基灭菌条件 0.14 MPa~ 0.15 MPa，2.5 h，121 ℃。装料容量较大时 ，灭 菌时间要适当延长 。 5.5 冷却 灭菌完毕并降温后 ，将料拖出灭菌柜 。待接种的原种瓶 （袋）或栽培种瓶 （袋） ，经冷却到 25 ℃± 1 ℃， 及时接种 。 5.6 接种 5.6.1 接种准备 接种前 15 h内，将接种室室内空间和地面进行消毒 ，接种 2 h前开启室内循环风净化空气 。接种人 员在准备室穿上防护工作服 ，经过风淋门进入接种室 。 5.6.2 接种方法 在无菌室内百级空气净化工作台上按无菌操作程序接种 。用塑料盖子的菌种 ，开盖接种时间不超过 5 s。用无菌透气膜的聚丙烯塑料袋接种 ，原种接入一块约 1.5 cm× 1.5 cm母种，栽培种播入约 50 g菌 种，及时将袋口用封口机封闭 ，并将袋内菌种与培养料摇匀 ，整理好菌袋竖立于周转筐中 。每一筐培养容 器应接同一菌株 ，接种完成后及时贴好标签 。 5.6.3 接种后处理 接种后，要及时清理 ，扫除废物 ，应用吸尘器吸除灰尘 ，并擦洗消毒传送带和地面 。 5.7 培养 不同菌株应分区分室培养 。培养室使用前 1 d~2 d，进行清洁消毒并开启新风系统 。在发菌 12 d内 室内温度控制 24 ℃± 1 ℃，发菌 13 d~30 d温度控制 21 ℃± 1 ℃，发菌 30 d至菌丝长满温度控制 19 ℃ ±1 ℃。保持空气相对湿度 60%，二氧化碳浓度 5 000×10-6，黑暗培养 。 5.8 入库 当菌丝长满时 ，应及时整架移入冷库贮存 。 4 DB32/T 4526 —2023 6 质量控制与检验 6.1 品种与种源质量检验 6.1.1 品种 从具有相应技术资质的供种单位