ICS 71.100.70 CCS Y 42 13 河北省 地方 标准 DB 13/T 5791—2023 化妆品中甲基汞的测定 2023 - 07 - 28发布 2023 - 08 - 28实施 河北省市场监督管理局 发布 DB 13/T 5791 —2023 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 本文件由河北省药品监督管理局提出并归口。 本文件起草单位： 河北省药品医疗器械检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心 。 本文件主要起草人： 孟珊、平惠娟、胡伟杰、花中霞、邵阳 。 DB 13/T 5791 —2023 1 化妆品中甲基汞的测定 1 范围 本文件描述了使用液相色谱 -电感耦合等离子体质谱联用法测定化妆品中甲基汞的方法。 本文件适用于膏霜类、乳液类、水剂类化妆品中甲基汞的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 化妆品中甲基汞经盐酸溶液提取后，以液相色谱进行分离，分离后的目标化合物经过雾化由载 气进入等离子体炬焰中，经过蒸发、解离、原子化、电离等过程，转化为带电荷的离子，经离子采集 系统进入质谱仪，质谱仪根据质荷比进行分离测定，以保留时间与质荷比定性，峰面积定量，以标 准曲线法计算含量。 5 试剂和材料 概述 5.1.1 除非另有说明，水为 GB/T 6682 规定的一级水 。 5.1.2 标准物质应经国家认证并授予标准物质证书。 5.1.3 标准溶液应临用现配。 试剂 测定过程需使用下列试剂： —— 甲醇（CH3OH）：色谱纯； —— 盐酸（HCl)：优级纯； —— 乙酸铵（ CH3COONH 4)：分析纯； —— L-半胱氨酸（ L-HSCH 2CH(NH 2)COOH）：分析纯； —— 氢氧化钠（ NaOH）：分析纯； —— 硝酸（HNO3）：分析纯。 试剂配置 5.3.1 流动相（ 5%甲醇+0.06 mol/L 乙酸铵+0.1%L-半胱氨酸）：称取 0.5 g L-半胱氨酸， 2.2 g乙 酸铵，置于 500 mL容量瓶中，用水溶解，再加入 25 mL甲醇，最后用水定容至 500 mL，作为等度洗 脱流动相。经 0.45μm有机系滤膜过滤后，超声脱气 30 min。临用现配。 5.3.2 盐酸溶液（ 2%，体积比）：量取 20 mL盐酸，加水并稀释至 1 000 mL。 5.3.3 氢氧化钠溶液（ 2 mol/L）：称取 8 g氢氧化钠，溶于水并稀释至 100 mL。 5.3.4 L-半胱氨酸溶液（ 10 g/L）：称取 0.1 g L-半胱氨酸，溶于 10 mL水中。临用现配。 DB 13/T 5791 —2023 2 标准物质 5.4.1 甲基汞溶液标准物质：标准值及扩展不确定度（ 63.5±2.4）μg/g，k=2。 5.4.2 乙基汞溶液标准物质：标准值及扩展不确定度（ 70.8±2.6）μg/g，k=2。 5.4.3 无机汞单元素溶液标准物质： 1 000 μg/mL。 标准溶液配制 5.5.1 甲基汞标准储备液（ 800 ng/mL ）：称取 1.2598 g甲基汞溶液标准物质，置 100 mL容量瓶 中，用5%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 5.5.2 乙基汞标准储备液（ 800 ng/mL ）：称取 1.1299 g 乙基汞溶液标准物质，置 100 mL容量瓶 中，用5%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 5.5.3 无机汞标准储备液（ 1 000 ng/mL ）：量取无机汞溶液标准物质 0.05 mL，置50 mL容量瓶 中，用盐酸溶液（ 5.3.2）稀释至刻度，摇匀，即得。 5.5.4 混合标准使用液（ 50 ng/mL ）：量取甲基汞标准储备液 0.625 mL 、乙基汞标准储备液 0.625 mL、无机汞标准储备液 0.5 mL，置同一 10 mL容量瓶中，加 5%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 5.5.5 甲基汞标准使用液（ 50 ng/mL ）：量取甲基汞标准储备液 0.625 mL ，置10 mL容量瓶中，加 5%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 5.5.6 甲基汞标准系列溶液：取 6个10 mL容量瓶，分别加入甲基汞标准使用液（ 5.5.5）0.1 mL、 0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL，用流动相稀释至刻度。此标准系列的浓度分别为 0.5 ng/mL、1.0 ng/mL 、2.0 ng/mL 、3.0 ng/mL 、4.0 ng/mL 、5.0 ng/mL。 6 仪器和设备 测定过程中需使用下列仪器和设备： —— 液相色谱 -电感耦合等离子体质谱仪（ LC-ICP-MS）； —— 天平； —— 混悬仪； —— 离心机：最大转速 10 000 r/min ； —— 超声清洗器； —— 滤膜：0.45 μm，水相/有机相。 7 分析步骤 样品提取 样品提取步骤如下： a) 称取混合均匀的样品 1 g（精确至 0.001 g）置25 mL刻度试管中，加 2%盐酸溶液定容至 刻度，涡旋 1 min，室温超声提取 30 min，期间振摇数次。再以 8 000 r/min 离心10 min。 b) 吸取2.0 mL上清液至 5 mL容量瓶或刻度试管中，逐滴加入氢氧化钠溶液（ 2 mol/L），使 pH为2～7。 c) 加入0.1 mL的L-半胱氨酸溶液（ 10 g/L），最后用水定容至刻度。过 0.45μm滤膜，得 样品溶液，待测。 d) 同时做空白试验。 注： 玻璃器皿均需以硝酸溶液（ 20%，体积比）浸泡 24 h，用自来水反复冲洗，最后用一级水冲洗 3遍以上。 仪器参数设置 7.2.1 液相色谱参考条件如下： ——色谱柱： C18分析柱（柱长 150 mm，内径4.6 mm，粒径5 μm）或等效色谱柱； ——流速：1.0 mL/min ； ——柱温：30℃； ——进样体积： 20 μL。 7.2.2 电感耦合等离子体质谱参考条件如下： DB 13/T 5791 —2023 3 ——射频功率 1 550 W； ——采样深度： 5 mm； ——雾化室温度： 2.7℃； ——载气（氩气）流量： 1.07 L/min ； ——辅助气（氩气）流量： 0.8 L/min ； ——积分时间： 0.2 s； ——检测质荷比： 202 m/z； ——使用碰撞池技术（ KED）。 标准曲线制作 7.3.1 调整仪器至最佳工作状态，待基线稳定后，测定混合标准使用液（ 5.5.4），确定 3种汞形 态化合物的分离度满足要求（ R＞1.5）。3种汞形态化合物混合标准溶液色谱图参见附录 A。 7.3.2 分别吸取甲基汞标准 系列溶液（ 5.5.6）20μL，按质量浓度由低到高注入 LC-ICP-MS进行测 定。 7.3.3 以甲基汞标准系列中目标化合物的浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 样品溶液的测定 依次将空白溶液和样品溶液 20 μL注入LC-ICP-MS中，得到色谱图，以保留时间与质荷比定性， 峰面积定量，以标准曲线法计算含量。 8 分析结果的表述 样品中甲基汞的含量按式（ 1）计算： 1000 1000m1000 )cc(x0 V f ……………………（ 1） 式中： x ——样品中甲基汞的含量，计算结果保留两位有效数字， mg/kg； f ——稀释因子； c ——经标准曲线得到的样品液中甲基汞的浓度， ng/mL； c0 ——经标准曲线得到的空白液中甲基汞的浓度， ng/mL； V ——加入提取液的体积， mL； m ——样品称样量， g。 9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算数平均值的 20%。 10 检出浓度 当样品称样量为 1 g，定容体积为 25 mL时，方法检出浓度为 0.006 mg/kg ，方法定量浓度为 0.02 mg/kg。 注： 本方法不作为仲裁方法。